| 心脏发育候选基因PYGO1 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定 |
| |
| 引用本文： | 刘明,刘宪楚,周军媚,谢华平,廖四芳,宋文,李佑锋,吴秀山,王跃群.心脏发育候选基因PYGO1 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定[J].激光生物学报,2012,21(6):528-531,540. |
| |
| 作者姓名： | 刘明 刘宪楚 周军媚 谢华平 廖四芳 宋文 李佑锋 吴秀山 王跃群 |
| |
| 作者单位： | 湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心;南华大学药学与生命科学学院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(30930054,31071999,31272396) |
| |
| 摘 要： | 利用RNA干扰技术构建PYGO1基因RNA干扰(RNAi)的真核表达质粒(pSUPER-PYGO1)。首先,针对PYGO1 cDNA序列设计并化学合成一对编码短发夹RNA序列,经退火插入到由BglⅡ和XhoⅠ酶切的pSU-PER质粒上构建重组RNAi质粒pSUPER-PYGO1。通过XbaⅠ酶切鉴定及测序分析验证构建效果,将正确构建的质粒转染大鼠心肌细胞系H9c2建立产生逆转录病毒的细胞克隆。通过RT-PCR和Western blot检测pSU-PER-PYGO1对H9c2细胞中PYGO1 mRNA和PYGO1蛋白的干扰效果。pSUPER-PYGO1质粒经酶切鉴定及测序分析,发现59nt寡核苷酸成功插入到预计位点,且序列完全一致;RT-PCR和Western blot检测结果显示转染pSUPER-PYGO1的细胞中PYGO1 mRNA和PYGO1蛋白量明显降低。因此,靶向PYGO1的pSUPER RNAi载体构建成功,为进一步从分子水平探讨PYGO1在心脏发育中的功能奠定了基础。
|
| 关 键 词： | PYGO1基因 RNA干扰 pSUPER H9c2 |
Construction and Identification of RNAi Recombinant Retroviral Vectors Expression siRNA for Heart Developmental Candidate Gene PYGO1 |
| |
| LIU Ming,LIU Xianchu,ZHOU Junmei,XIE Huaping,LIAO Sifang,SONG Wen,LI Youfeng,WU Xiushan,WANG Yuequn.Construction and Identification of RNAi Recombinant Retroviral Vectors Expression siRNA for Heart Developmental Candidate Gene PYGO1[J].ACTA Laser Biology Sinica,2012,21(6):528-531,540. |
| |
| Authors: | LIU Ming LIU Xianchu ZHOU Junmei XIE Huaping LIAO Sifang SONG Wen LI Youfeng WU Xiushan WANG Yuequn |
| |
| Institution: | 1(1.The Center for Heart Development,College of Life Sciences,Hunan Normal University,Changsha 410006,Hunan,China; 2.College of Pharmacy and Life Science,University of South China,Hengyang 421001,Hunan,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
