神经生长因子在雄鸡睾丸组织中的定量表达

为探讨神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)在雄鸡睾丸组织中的表达情况。分别取20 w、24 w、28 w、35 w龄雄鸡睾丸组织,一部分经冻存处理后采用Trizol试剂提取Total RNA。根据GenBank中已公布的原鸡NGF基因序列,利用Primer 5.0设计合成特异性引物,通过两步法RT-PCR扩增出NGF基因片段,然后利用实时荧光定量PCR以β-actin为内参基因进行相对定量分析。另一部分经冻存处理后用RIPA组织裂解液提取总蛋白进行Western blot分析。结果显示两步法RT-PCR扩增出的NGF基因片段经电泳检测为219 bp,符合预期片段大小,与GenBank中登录的鸡NGF基因比对,同源性达99%;NGF基因在不同周龄雄鸡睾丸组织中的mRNA表达水平表现为:性成熟发育期(20 w-28 w)雄鸡睾丸组织NGF mRNA的表达量随鸡龄的增加呈上升趋势,且28 w达到高峰,成年期(35 w)有所下降。Western blot检测到NGF的蛋白表达量随各发育阶段呈增加趋势,在20 w龄前,蛋白表达量处于较低水平,在进入睾丸迅速发育期(20 w-28 w)后,表达量大幅度增加,在35 w基本达到峰值。提示NGF mRNA的表达随着睾丸组织的发生、发育呈现一定的变化规律,且NGF在睾丸组织的发育及精子的发生等阶段起到重要的调节作用,从而为后续研究NGF在禽类生殖系统中的作用提供一定的理论依据。