重组人脑利钠肽的纯化与活性测定

目的:建立重组人脑利钠肽(BNP)的纯化方法,筛选疏水作用层析纯化介质并优化纯化条件。方法:根据带有6×His标签的Dsb A-BNP融合蛋白的特性,采用金属螯合亲和层析(IMAC)、凝血酶酶切去除His-Dsb A、阳离子交换层析等步骤进行粗纯;利用BNP的疏水性,分别选用不同疏水性质的介质Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)及Source 15进行精纯;用SDS-PAGE和HPLC检测纯化获得的BNP的含量及纯度;用细胞法对BNP进行活性检测。结果:经IMAC、酶切去除标签蛋白及阳离子交换层析纯化后,获得纯度为60%的BNP;Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)等疏水介质与BNP的吸附效果不佳,而经Source 15反相层析后,BNP的纯度可达98.98%,活性检测与对照品一致。结论:利用Source 15反相层析可获得高纯度、活性优的BNP原液,可满足后期制剂处方实验的要求,为后续研究奠定了基础。