红星梭子蟹变应原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫学鉴定

克隆、表达红星梭子蟹蟹肉中变应原原肌球蛋白（Tropomyosin），并对其免疫学特性进行鉴定。RT-PCR克隆红星梭子蟹（Portunus sanguinolentus）蟹肉中变应原原肌球蛋白的全长基因，根据序列设计带有酶切位点的特异性引物，扩增蟹Tropomyosin的完整开放阅读框，与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia. coli BL21(DE3)，诱导表达后，Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白，Western-blot检测其免疫学活性，胰酶消化后进行MALDI-TOF-MS质谱分析鉴定。克隆所得蟹Tropomyosin基因包括一个编码285个氨基酸的开放阅读框。序列分析结果显示所克隆得到的基因与已知虾、螨、蟑螂等的Tropomyosin变应原基因有较高的同源性（>80%）。根据变应原的命名规则，将其命名为Pors 1，并提交GenBank数据库，登录号为EF143836。重组蟹Tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达，表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后进行Western-blot检测，结果显示该重组蛋白具有良好的免疫学活性，MALDI-TOF-MS质谱分析进一步证实了该重组变应原的正确性。本研究成功克隆和表达了红星梭子蟹变应原Tropomyosin，为蟹过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。

Cloning, expression and immunocharacterization of allergen tropomyosin in crab