苍白杆菌核糖-5-磷酸异构酶B基因的克隆及表达 |
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引用本文: | 沈敏,姚雪梅,张孝峰,李良智,胡翠英,鞠鑫.苍白杆菌核糖-5-磷酸异构酶B基因的克隆及表达[J].生物技术,2018(3). |
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作者姓名: | 沈敏 姚雪梅 张孝峰 李良智 胡翠英 鞠鑫 |
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作者单位: | 苏州科技大学化学生物与材料工程学院 |
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摘 要: | 目的]将新筛选出的苍白杆菌菌株中的核糖-5-磷酸异构酶B(Rpi B)克隆到大肠杆菌中进行异源表达优化。方法]以苍白杆菌菌株基因组为模板PCR扩增Rpi B基因,经酶切连接表达载体p ET-28a后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达及优化,利用SDS-PAGE分析表达情况。通过LC-MS-MS验证重组酶活性。结果]SDS-PAGE分析表明,核糖-5-磷酸酶在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白,分子量在19 k Da左右。优化结果表明在16℃下需要IPTG诱导20 h后蛋白表达量最多。重组粗酶液在30℃下转化L-鼠李糖为L-鼠李酮糖,转化率为19%。结论]成功克隆并表达出来源于苍白杆菌的Rpi B酶,它对其非天然底物糖L-鼠李糖表现出了异构酶活性。
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