| 2型猪链球菌磷酸甘油酸激酶基因的克隆表达及酶活性测定 |
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| 引用本文： | 郭晓璐,龚秀芳,陈家锋,丁晨曦,胡丹,潘秀珍,王长军.2型猪链球菌磷酸甘油酸激酶基因的克隆表达及酶活性测定[J].中国生物工程杂志,2018,38(3):16-23. |
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| 作者姓名： | 郭晓璐 龚秀芳 陈家锋 丁晨曦 胡丹 潘秀珍 王长军 |
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| 作者单位： | 1 中国药科大学生命科学与技术学院 南京 2111982 南京军区疾病预防控制中心 南京 210002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81481920);军队后勤科研计划项目(AWS16J021) |
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| 摘 要： | 目的:克隆表达2型猪链球菌中磷酸甘油酸激酶(PGK)并对其酶学特性进行测定。方法:采用PCR方法从05ZYH33基因组中扩增出pgk片段,构建重组表达质粒p ET28a:pgk,经双酶切及测序验证正确的质粒转化入E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,重组PGK蛋白经SDSPAGE和质谱鉴定并测定其酶学活性。结果:PGK在大肠杆菌中可溶性表达,纯化后得到约43k Da的重组PGK蛋白,其酶促反应最适温度为25℃,最适pH为7.5,2型猪链球菌PGK的酶活性为75U/ml,PGK相对于3-PGA的Km值为1.744mmol/L,Vmax为0.143mmol/(L·min),相对于ATP的Km值为2.266mmol/L,Vmax为0.318mmol/(L·min)。结论:利用原核表达系统成功地表达了2型猪链球菌中的PGK,并获得了活性较好的重组PGK,酶学检测发现纯化的PGK具有良好的体外活性,为进一步研究该病在2型猪链球菌致病及代谢机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 2型猪链球菌 磷酸甘油酸激酶 克隆表达 酶活性 |
| 收稿时间： | 2017-09-29 |
Gene Cloning,Expression and Identification of Phosphoglyceric Kinase of Streptococcus suis Serotype 2 |
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| Xiao-lu GUO,Xiu-fang GONG,Jia-feng CHEN,Chen-xi DING,Dan HU,Xiu-zhen PAN,Chang-jun WANG.Gene Cloning,Expression and Identification of Phosphoglyceric Kinase of Streptococcus suis Serotype 2[J].China Biotechnology,2018,38(3):16-23. |
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| Authors: | Xiao-lu GUO Xiu-fang GONG Jia-feng CHEN Chen-xi DING Dan HU Xiu-zhen PAN Chang-jun WANG |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Streptococcus suis serotype 2 Phosphoglycerate kinase Prokaryotic expression Enzymatic activity |
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