杜氏盐藻随机MAR文库的构建

核基质附着区(Matrix attachment region，MAR)是一段与核基质结合的DNA序列。为分离杜氏盐藻核基质附着区，我们首次构建了杜氏盐藻MAR文库。首先用0．5％ Triton X-100裂解细胞，经30％和70％ Percoll不连续梯度离心分离盐藻细胞核，再用二碘水杨酸锂(lithium diiodosalicylate，LIS)去除组蛋白和限制酶消化除去结合松弛的DNA片段，最后通过蛋白酶K消化和乙醇沉淀提取盐藻核基质DNA。采用4种限制酶酶切，T4DNA连接酶连至用相应限制酶酶切的pUC18载体上，转化E．coli JM109感受态细胞，挑选阳性克隆，构建MAR文库。部分测序分析表明，克隆的DNA片段具有明显的MAR特征.为进一步研究MAR对基因表达的调控作用及其作用机制提供了基础。