ELP[Ⅰ]50标签在重组硫氧还蛋白分离纯化中的应用及PEG对其相变温度的影响 |
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引用本文: | 葛高顺,张立超,李军明,胡学军.ELP[Ⅰ]50标签在重组硫氧还蛋白分离纯化中的应用及PEG对其相变温度的影响[J].微生物学通报,2013,40(6). |
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作者姓名: | 葛高顺 张立超 李军明 胡学军 |
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作者单位: | 大连大学医学院 辽宁大连 116622 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目,辽宁省教育厅高校科研计划项目,大连大学博士启动基金 |
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摘 要: | 目的]使用自行设计的类弹性蛋白(Elastin-like protein,ELP) ELPⅠ]50作为非色谱纯化标签,分离纯化重组硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx),并研究聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)对ELPⅠ]50-Trx相变温度(Inverse temperature transition,Tt)的影响.方法]人工合成Trx基因,将其亚克隆到自行构建的表达载体pET28编码ELPⅠ]50标签下游,转入大肠杆菌BLR(DE3)进行表达.融合蛋白表达后,采用可逆相变循环(Inverse transition cycling,ITC)分离纯化,并检测不同浓度PEG时的Tt值.结果]成功表达、分离纯化出融合蛋白ELPⅠ]50-Trx,检测出该蛋白浓度为25 μmol/L时,Tt为28.6℃;而当PEG的浓度为5%、10%、15%、20%时,Tt分别降至22.3℃、15.9℃、6℃、0℃.结论]ELPⅠ]50标签高效纯化重组蛋白具有操作简便、成本较低、易于扩大的优势,而PEG能降低蛋白的Tt值,进一步增强分离纯化效果,扩大使用范围,可望应用于分离纯化多种重组蛋白.
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关 键 词: | 类弹性蛋白标签 硫氧还蛋白 分离纯化 聚乙二醇 相变温度 |
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