| 斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系的构建 |
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| 作者姓名： | 曾婷 付贵芳 谢缤灵 杜涵 谢华平 印遇龙 |
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| 作者单位： | 动物肠道功能调控湖南省重点实验室,长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,动物营养与人体健康实验室,长沙410081;动物肠道功能调控湖南省重点实验室,长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,动物营养与人体健康实验室,长沙410081;淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,长沙410081;动物肠道功能调控湖南省重点实验室,长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,动物营养与人体健康实验室,长沙410081;淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,长沙410081;中国科学院亚热带农业生态研究所,中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室,长沙410125 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;湖湘高层次人才聚集工程项目;领军人才项目 |
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| 摘 要： | microRNA(miRNA)是一类内生的、长度约为19~23个核苷酸的非编码RNA,通过影响mRNA的稳定性和翻译,来参与基因表达的转录后调控。生物信息学分析表明该基因在各个物种中高度保守。为了阐明该基因在肠道发育中的作用,本文利用Cloning free CRISPR/Cas9基因编辑技术构建miR-196a-1基因敲除的斑马鱼品系。首先通过分析软件筛选出斑马鱼miR-196a-1基因的两个敲除位点,两个敲除位点相隔132 bp,利用PCR技术扩增miR-196a-1的向导DNA,再以向导DNA为模板转录得到miR-196a-1的sgRNA,将miR-196a-1基因的sgRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎1细胞期胚胎中。斑马鱼胚胎发育到36 hpf后进行基因编辑的有效性检测,研究结果显示,miR-196a-1基因出现102 bp碱基的缺失,表明CRISPR/Cas9系统对miR-196a-1基因的敲除有效。对其F0代、F1代、F2代进行筛选,成功获得斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系,为研究miR-196a-1在肠道发育中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 斑马鱼 microRNA CRISPR/Cas9 miR-196a-1基因 |
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