| 重组人β-catenin原核表达条件的优化及生物学活性鉴定 |
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| 引用本文： | 牛夏忆,韩茂椿,李淼,陈云雨,刘晓平.重组人β-catenin原核表达条件的优化及生物学活性鉴定[J].微生物学杂志,2020(1):58-66. |
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| 作者姓名： | 牛夏忆 韩茂椿 李淼 陈云雨 刘晓平 |
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| 作者单位： | 皖南医学院 药物筛选与评价研究所，安徽 芜湖 241002,皖南医学院 药物筛选与评价研究所，安徽 芜湖 241002,皖南医学院 药物筛选与评价研究所，安徽 芜湖 241002,皖南医学院 药物筛选与评价研究所，安徽 芜湖 241002,皖南医学院 药物筛选与评价研究所，安徽 芜湖 241002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（81703546）；安徽省自然科学基金项目（1808085QH265)；安徽省高校自然科学研究重大项目（KJ2019ZD30）;吉林省科技发展计划项目（20160520045JH）；皖南医学院博士科研启动基金项目（RCQD201617）；皖南医学院大学生科研资助金项目（WK2018S54） |
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| 摘 要： | 优化重组人β-catenin(138～686 aa)在大肠埃希菌中的原核表达条件,经分离纯化后进行生物学活性鉴定。利用基因工程技术,将构建的重组质粒β-catenin-pET-30a(+)转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后进行β-catenin原核表达。为了提高β-catenin表达量,从诱导时间、诱导温度与IPTG诱导浓度3个单因素方面进行原核表达条件优化。β-catenin经HisTrap层析柱分离纯化后,以荧光偏振实验和酶联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)进行生物学活性鉴定。构建的工程菌经原核表达条件优化后,确定诱导温度25℃、诱导时间10 h、0.2 mmol/L IPTG作为β-catenin最佳原核表达条件。荧光偏振实验和ELISA实验说明,纯化的β-catenin具有良好的生物学活性。本研究成功进行了重组人β-catenin原核表达条件的优化与生物学活性鉴定,为深入研究β-catenin在肿瘤免疫抵抗中的生物学功能奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | β-catenin 表达优化 亲和层析 荧光偏振 酶联免疫吸附测定实验 |
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