| 抗人AFP单链抗体与藻胆蛋白融合蛋白的构建、表达与活性分析 |
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| 引用本文： | 陈华新,武静,赵瑾,姜鹏.抗人AFP单链抗体与藻胆蛋白融合蛋白的构建、表达与活性分析[J].中国生物工程杂志,2016,36(5):74-80. |
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| 作者姓名： | 陈华新 武静 赵瑾 姜鹏 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室 青岛 266071;
2. 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室 青岛 266071;
3. 中国科学院大学 北京 100049 |
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| 基金项目： | 国家"863"计划(2014AA093505,2014AA093501),国家海洋公益性行业科研专项经费项目(201205027-2),国家自然科学基金(41276164)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建多基因表达载体,在大肠杆菌中同时表达AFP单链抗体(sc Fv)和蓝藻别藻蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白(apc A)组成的融合蛋白(sc Fv-apc A)、藻胆蛋白裂合酶(cpc S)及藻红蛋白生物合成酶(Ho1和peb S),获得共价结合藻红胆素的融合蛋白(sc Fv-apc A-PEB)。方法:利用融合PCR将sc Fv和apc A基因连接起来,形成sc Fv-apc A融合基因,并将该融合基因与cpc S克隆到表达载体p CDFDuet-1中;将Ho1和peb S基因克隆到表达载体pRSFDuet-1中。将两种载体共转化到大肠杆菌中,IPTG诱导重组蛋白表达,经亲和层析获得重组蛋白,通过光谱学分析和抗体竞争性抑制法,测定重组蛋白的生物学活性。结果:成功表达融合蛋白sc Fv-apc A-PEB,分子质量约为45k Da,与理论值相符,其最大吸收峰为549.5nm,最大荧光发射峰为560nm,竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,竞争抑制率达到48%。结论:利用大肠杆菌表达系统,获得了同时具有荧光特性和免疫学活性的重组蛋白。
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| 关 键 词： | 融合蛋白 单链抗体 甲胎蛋白 别藻蓝蛋白 |
| 收稿时间： | 2015-11-09 |
Expression and Characterization of Fusion Protein of Single-chain Variable Fragment of Alpha Fetoprotein and Allophycocyanin Alpha Subunit |
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| CHEN Hua-xin,WU Jing,ZHAO Jin,JIANG Peng.Expression and Characterization of Fusion Protein of Single-chain Variable Fragment of Alpha Fetoprotein and Allophycocyanin Alpha Subunit[J].China Biotechnology,2016,36(5):74-80. |
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| Authors: | CHEN Hua-xin WU Jing ZHAO Jin JIANG Peng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fusion protein Single-chain variable fragment antibody Alpha fetoprotein Allophycocyanin |
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