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三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析
引用本文:吴圣楠,隗黎丽,李海军,付建平,刘毅. 三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析[J]. 水生生物学报, 2017, 41(1): 50-55. DOI: 10.7541/2017.7
作者姓名:吴圣楠  隗黎丽  李海军  付建平  刘毅
作者单位:1. 江西师范大学生命科学学院,南昌,330022;2. 江西农业大学动物科学学院,南昌,330045
基金项目:国家自然科学基金项目(31060359),江西省自然科学基金(20122BAB204017)资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China(31060359),the Natural Science Foundation of Jiangxi Province(20122BAB204017)
摘    要:
对三角帆蚌HSP70基因序列进行全长克隆及其分子生物学分析,并检测其在不同水温刺激下鳃组织中的表达变化。通过高通量转录组测序获得三角帆蚌HSP70基因(HcHSP70)长片段,采用3'RACE对其进行了3'末端克隆,经拼接得到HcHSP70 cDNA全长序列。采用多种分子生物学软件对HcHSP70 cDNA全长序列进行了特征分析,采用实时荧光定量PCR技术检测了其组织分布,并结合Western-blot技术检测蚌鳃中该基因mRNA与蛋白经不同水温刺激后的表达变化。结果显示,HcHSP70 cDNA全长为2298 bp,其中开放阅读框为1974 bp,编码657个氨基酸。预测分子量大小为71.6 Ku,pH7.0时的理论等电点为5.61。氨基酸序列分析表明,HcHSP70氨基酸序列含HSP70家族的3个标签序列(I9DLGTTYS16、I197FDLGGGTFDVSIL210和I336 VLVGGSTRIPKVQK350),与长牡蛎及泥蚶的HSP70同源性最高(91%)。实时荧光定量PCR检测结果显示,HcHSP70在鳃、性腺、肝胰腺、外套膜及肌肉等5种被检组织中均有表达,以肝胰腺中的表达水平最高。实时荧光定量PCR与Western-blot技术检测皆表明,蚌鳃组织中HcHSP70基因与蛋白的表达量在37℃时达到最高,而在40℃水温刺激下表达水平下调至正常值,表明其在适应高温刺激时发挥了重要作用。

关 键 词:三角帆蚌   热休克蛋白70   序列分析   基因表达   水温刺激
收稿时间:2016-02-01

CLONING AND EXPRESSION ANALYSIS OF HEAT SHOCK PROTEIN 70 GENE FROM HYRIOPSISCUMINGII
WU Sheng-Nan,WEI Li-Li,LI Hai-Jun,FU Jian-Ping,LIU Yi. CLONING AND EXPRESSION ANALYSIS OF HEAT SHOCK PROTEIN 70 GENE FROM HYRIOPSISCUMINGII[J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2017, 41(1): 50-55. DOI: 10.7541/2017.7
Authors:WU Sheng-Nan  WEI Li-Li  LI Hai-Jun  FU Jian-Ping  LIU Yi
Abstract:
Keywords:Hyriopsis cumingii  Heat shock protein 70  Cloning  Gene expression  Thermal stress
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