反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒1b和2a基因型检测 |
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引用本文: | 赵娜,刘金霞,孙殿兴.反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒1b和2a基因型检测[J].病毒学报,2017,33(1). |
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作者姓名: | 赵娜 刘金霞 孙殿兴 |
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作者单位: | 承德医学院病原生物学教研室,承德067000;中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心,石家庄050082;承德医学院病原生物学教研室,承德,067000;中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心,石家庄,050082 |
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摘 要: | 利用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)对中国主要的丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型进行扩增。首先,收集临床采样标本,对其进行定量和定性。第二,分别根据HCV 1b和HCV 2a序列的5’非转录区(5’UTR)设计相应的RT-LAMP引物。第三,利用与非特异模板的交叉反应以评价各引物的特异性,利用内切酶酶切产物以进一步保证扩增准确。第四,利用倍比稀释的模板以评价各引物的灵敏性,并用依赖钙黄绿素/Mn2+的可视化方法与电泳结果比较。最后,利用RT-LAMP对所有采样标本进行HCV 1b和HCV 2a两组平行反应,SPSS统计学软件对其实用性初步评价。结果显示,所设计的RT-LAMP引物特异性好,HCV 1b和HCV 2a型产物大小均与预期相同。最低可检测的模板量为100IU/mL,且可视化染色方法电泳结果相一致。统计学软件比较扩增结果表明RT-LAMP与实时荧光定量PCR之间没有统计学差异(P0.05)。综上,RT-LAMP设备简单,操作简便,具有在基层医疗机构的应用前景。
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关 键 词: | 丙型肝炎病毒(HCV) 中国 1b基因型 2a基因型 反转录环介导等温扩增 |
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