| HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立 |
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| 引用本文： | 王云华 王睿睿 杨柳萌 李健峰 徐维明 郑永唐. HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立[J]. Virologica Sinica, 2006, 21(2): 126-130 |
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| 作者姓名： | 王云华 王睿睿 杨柳萌 李健峰 徐维明 郑永唐 |
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| 作者单位： | 中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室，中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室，中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室，中国医学科学院医学生物学研究所，中国医学科学院医学生物学研究所，中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室 云南昆明650223中国科学院研究生院，北京100039，云南昆明650223中国科学院研究生院，北京100039，云南昆明650223，云南昆明650231，云南昆明650231，云南昆明650223 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(2003AA219142)，国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14)，中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216，KSCX1-SW-11)，云南省自然科学基金(2002C0066M)，云南省科技攻关计划(2004NG12) |
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| 摘 要： | 从HIV-1IIIB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%。包涵体经TritonX-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyls-200H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩。经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性。用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选。
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| 关 键 词： | HIV-1 蛋白酶 表达 纯化 抑制剂 |
| 收稿时间： | 2005-10-24 |
| 修稿时间： | 2005-12-19 |
Expression and Purification of HIV-1 Protease and the Establishment of a Method for Protease Inhibitor Screening |
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| WANG Yun-hua, WANG Rui-rui, YANG Liu-meng, Li Jian-feng, XU Wei-ming, ZHENG Yong-tanga. Expression and Purification of HIV-1 Protease and the Establishment of a Method for Protease Inhibitor Screening[J]. 中国病毒学(英文版), 2006, 21(2): 126-130 |
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| Authors: | WANG Yun-hua WANG Rui-rui YANG Liu-meng Li Jian-feng XU Wei-ming ZHENG Yong-tanga |
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| Affiliation: | 1. Laboratory of Immunopharmacology, Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, Kunming, Yunnan 650223,China; 2. Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences, Kunming, Yunnan 650231, China ; 3. Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HIV-1 protease expression purification inhibitors |
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