幽门螺杆菌katA基因功能及其在耐受氧化损伤中的作用分析

【目的】过氧化氢酶（KatA）是幽门螺杆菌编码的重要毒力因子,在抵抗宿主免疫杀伤和疫苗研发等方面具有重要功能。为了鉴定幽门螺杆菌 KatA 的酶学特性,并分析其在幽门螺杆菌氧化耐受中的功能。【方法】首先,从幽门螺杆菌临床耐药菌株 Hp＿G272 基因组中分离 katA 基因,并在大肠杆菌中克隆表达、分离纯化KatA^G272 蛋白;然后,利用 CAT 检测试剂盒体外分析 KatA^G272 的过氧化氢酶活性;其次,利用同源重组技术构建 katA 基因工程菌株,包括敲除菌株和回补菌株;最后,通过比较野生菌株与工程菌株生长表型差异、分解过氧化氢能力差异及耐受过氧化氢能力差异,阐述 katA 基因的功能及其在幽门螺杆菌耐受氧化损伤中的作用。【结果】在大肠杆菌中成功克隆表达并分离纯化 KatA^G272,体外酶学分析表明,KatA^G272 是一类嗜酸性过氧化氢酶,基因敲除分析表明,敲除该基因幽门螺杆菌丧失分解和耐受过氧化氢的能力,而回补该基因幽门螺杆菌回复分解和耐受过氧化氢的能力。【结论】katA 基因是幽门螺杆菌分解和耐受过氧化氢的唯一功能基因,在幽门螺杆菌氧化耐受中具有重要功能。