从HFRS患者的PBMC建立BLCL及其意义

体外研究汉滩病毒(Hantaan virus，HTNV)S基因及其5’端、3’端在BLCL(EBV-transformed B lymphoblastoid cell line，BLCL)内稳定表达的意义，为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础。本研究从肾综合征出血热(HFRS)患者的外周血单个核细胞(PBMC)建立与HTNV特异性CTL同源的患者自身的EB病毒转化的B淋巴母细胞系，将含有不同HTNVS基因片段的重组真核表达载体转染入BLCL，获得长期稳定表达，作为靶细胞系，为下～步进行CTL杀伤试验提供靶细胞系。设计4条引物，用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出s基因全读码框(37—1326bp)及s基因5’端(37—501bp)，S基因3’端(502—1326bp)，用TA克隆将其克隆入pcDNA3．1／V5．His-TOPO载体中，成功构建pcDNA3．1-S及pcDNA3．1-S—N、pcDNA3．1-S-C真核表达载体，并通过脂质体转染至BLCL细胞中，进行了稳定表达。间接免疫荧光成功检测到pcDNA3．1-S及pcDNA3．1-S-N、pcDNA3．1-S．C在BLCL细胞中的表达。pcDNA3．1-S及pcDNA3．1-S—N、pcDNA3．1一S—C真核表达载体有较高的转染效率，目的基因能在宿主细胞中长期稳定表达，有利于研究HTNV-S基因在T细胞表位研究中的意义。建立的特异性CTL克隆对表达完整NP、NP羧基和氨基端肽段的靶细胞均有比较明显的杀伤效应，平均杀伤率分别为50．2％、39．0％和25-4％。HTNV-NP优势T细胞表位可能主要位于病毒核蛋白的羧基端。

Significance of BLCLConstructed from PBMC in HFRS Patients