| NRSF慢病毒干涉载体的构建及功能初步检测 |
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| 引用本文： | 杨印祥,李艳华,刘庆斌,张赛男,陈 琳,吕 洋,白慈贤,南 雪,裴雪涛.NRSF慢病毒干涉载体的构建及功能初步检测[J].生物化学与生物物理进展,2008,35(2):151-158. |
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| 作者姓名： | 杨印祥 李艳华 刘庆斌 张赛男 陈 琳 吕 洋 白慈贤 南 雪 裴雪涛 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室,北京,100850 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)领域重大专项
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国家重点基础研究发展计划(973计划)
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国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 为研究神经元限制性沉默因子(NRSF)负调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,拟通过RNAi的方法降低NRSF表达以进一步观察其调控的下游基因的表达情况.构建含人胰岛素启动子-荧光素酶(HIP-LUC)的pcDNA3.1报告载体.通过RNAi序列设计软件进行NRSF干涉片段及脱靶对照片段的设计,然后构建慢病毒干涉载体.包装产生慢病毒干涉毒液,用其感染HeLa细胞获得稳定干涉NRSF的细胞株,利用RT-PCR、实时定量PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色等方法检测NRSF的干涉效果及其下游基因的表达情况,观察干涉NRSF后胰岛素启动子报告载体荧光素酶活性的变化.构建具有NRSF干涉效果的慢病毒干涉载体成功,并获得了稳定干涉NRSF及脱靶对照的HeLa细胞株,RT-PCR及实时定量PCR检测结果表明,NRSF干涉片段的干涉效率为56%(n=6,P<0.01),蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色方法检测证实干涉后NRSF蛋白表达水平明显降低.RT-PCR实验表明干涉NRSF后下游基因开始表达,荧光素酶活性分析表明,干涉NRSF后胰岛素启动子活性增强了2.4倍(n=3,P<0.01).上述结果表明,成功构建NRSF的慢病毒干涉载体并获得稳定干涉NRSF的HeLa细胞株,干涉NRSF后,其下游基因特别是胰岛素基因开始表达.这一研究工作有助于我们进一步了解NRSF在胰岛细胞发育分化中的调控作用.
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| 关 键 词： | 神经元限制性沉默因子 神经元限制性沉默元件 RNA干涉 胰岛素 病毒 干涉效率 载体 功能 检测 Vector RNA Interference Study Function 调控作用 发育分化 工作 基因特 增强 启动子活性 分析表 实验 表达水平 蛋白质 免疫荧光染色方法 |
| 收稿时间： | 2007-06-16 |
| 修稿时间： | 2007-08-06 |
Construction and Function Study of NRSF Lentiviral RNA Interference Vector |
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| YANG Yin-Xiang,LI Yan-Hu,LIU Qing-Bin,ZHANG Sai-Nan,CHEN Lin,LU Yang,BAI Ci-Xian,NAN Xue and PEI Xue-Tao.Construction and Function Study of NRSF Lentiviral RNA Interference Vector[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2008,35(2):151-158. |
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| Authors: | YANG Yin-Xiang LI Yan-Hu LIU Qing-Bin ZHANG Sai-Nan CHEN Lin LU Yang BAI Ci-Xian NAN Xue and PEI Xue-Tao |
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| Institution: | Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China;Stem Cell and Regenerative Medicine Laboratory, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | neuronal restrictive silencer factor (NRSF) neuronal restrictive silencer element (NRSE) insulin RNA interference |
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