血红素加氧酶-1重组载体的构建及在胃癌细胞中的初步研究

目的构建人血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1，HO-1）及其突变体的真核表达载体，观察其在胃腺癌细胞中HO-1表达和活性变化，研究HO-1活性变化的胃腺癌细胞对顺铂抗药能力的变化，为进一步研究HO-1对肿瘤细胞影响机制奠定基础。方法根据GenBank中HO-1cDNA序列设计引物，调取基因并克隆入pcDNA3．1（＋）质粒中，构建表达人野生型HO-1与突变型HO-1（HO-1G143H）的重组质粒。脂质体介导重组质粒转染胃腺癌细胞BGC823，用RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞中HO-1mRNA的表达和蛋白表达水平，体外测定HO—1活性变化，应用顺铂进行体外抗药性实验。结果酶切鉴定和测序证实，HO-1真核表达载体构建成功；转染质粒后的BGC823，HO-1的mRNA和蛋白的表达水平明显上升；转入野生型质粒的细胞HO-1活性上升，转入突变型质粒的细胞HO-1活性下降；HO-1活性下降BGC823细胞抗顺铂杀伤能力增强。结论构建了HO-1野生型与突变型真核表达载体；将其转入胃腺癌细胞，引起了HO-1的mRNA和蛋白表达的增加和活性变化；体外实验表明，HO-1活性下降的BGC823细胞抗顺铂能力增强。