| 表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法的研究 |
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| 引用本文： | 娄强,朱涛,王家学,吴旸,朱于莉,瞿涤. 表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法的研究[J]. 微生物与感染, 2008, 3(1): 11-16 |
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| 作者姓名： | 娄强 朱涛 王家学 吴旸 朱于莉 瞿涤 |
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| 作者单位： | 复旦大学病原生物学研究所、生物医学研究院、上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室,上海,200032;复旦大学病原生物学研究所、生物医学研究院、上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室,上海,200032;复旦大学病原生物学研究所、生物医学研究院、上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室,上海,200032;复旦大学病原生物学研究所、生物医学研究院、上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室,上海,200032;复旦大学病原生物学研究所、生物医学研究院、上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室,上海,200032;复旦大学病原生物学研究所、生物医学研究院、上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室,上海,200032 |
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| 基金项目： | 科技部国际科技合作项目 , 国家重点基础研究发展计划(973计划) , 上海市科委资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 探讨高效的表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法。方法 分别应用2种不同的穿梭质粒pMAD和pBT2,连接目的基因表皮葡萄球菌双组分信号转导系统arlS、saeRS和lytS的上下游片段,构建重组质粒,电转入金黄色葡萄球菌RN4220后转入表皮葡萄球菌1457,利用抗性和生物标志筛选出针对特定目的基因的突变株SE1457-ΔarlS、SE1457-ΔsaeRS和SE1457-ΔlytS,比较2种方法的优、缺点。结果 利用pMAD和pBT2分别构建基因删除同源重组质粒pMAD-ΔsaeRS、pBT2-ΔarlS和pBT2-ΔlytS,并均获得相应的表皮葡萄球菌基因删除突变株。在筛选过程中,以pMAD为载体构建基因删除突变株,仅需1轮抗性/蓝白斑筛选过程即获突变株;而以pBT2为载体构建基因删除突变株筛选方法,需经过5~10轮的筛选才可获得突变株。基因删除突变株经聚合酶链反应(PCR)和测序等鉴定确认。与野生株相比,SE1457-ΔarlS突变株的生物膜形成能力降低90.96%,而SE1457-ΔsaeRS和SE1457-ΔlytS株的生物膜形成能力略有增加。结论 以pMAD载体构建表皮葡萄球菌突变株比较快速和简便。
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| 关 键 词： | 基因删除 pMAD pBT2 表皮葡萄球菌 双组分信号转导系统 |
| 修稿时间： | 2008-01-03 |
Methods of constructing Staphylococcus epidermoiis gene mutants via different plasmids |
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| LOU Qiang,ZHU Tao,WANG Jia-xue,WU Yang,Zhu Yu-li,QU Di. Methods of constructing Staphylococcus epidermoiis gene mutants via different plasmids[J]. Journal of Microbes and Infection, 2008, 3(1): 11-16 |
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| Authors: | LOU Qiang ZHU Tao WANG Jia-xue WU Yang Zhu Yu-li QU Di |
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