| 人源溶菌酶基因LYZL4在毕赤酵母中的重组表达及活性测定 |
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| 引用本文： | 李新新,陶建军,余龙.人源溶菌酶基因LYZL4在毕赤酵母中的重组表达及活性测定[J].中国生物工程杂志,2014,34(1):79-85. |
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| 作者姓名： | 李新新 陶建军 余龙 |
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| 作者单位： | 复旦大学遗传工程国家重点实验室 遗传学研究所 上海 200433 |
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| 基金项目： | 国家重大新药创制科技重大专项项目资助（2011ZX09102-007-01） |
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| 摘 要： | LYZL4是本实验室克隆的一种c型人溶菌酶基因,根据毕赤酵母密码子偏爱性对LYZL4基因进行优化设计,优化后的基因克隆至具有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的pPIC9K载体中。通过电转化方法整合到甲醇营养型毕赤酵母表达菌株GS115基因组上,再利用不同浓度梯度的G418抗性YPD固体培养基筛选高拷贝转化子,经摇瓶发酵后,其上清液在SDS-PAGE胶上14.4 kDa处出现明显的蛋白条带,该蛋白条带经质谱鉴定证实是人LYZL4蛋白。以人溶菌酶(164 071U/mg)作为标准品,使用艳红微球菌作为底物,通过比色法测定重组LYZL4溶菌酶蛋白的活性,结果显示重组人溶菌酶LYZL4蛋白具有明显的溶菌活性,其酶活力可达38893U/ml。
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| 关 键 词： | 重组人溶菌酶LYZL4 毕赤酵母 溶菌活性 |
| 收稿时间： | 2013-11-29 |
| 修稿时间： | 2013-12-16 |
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