卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白（ZnT-7-like）的基因克隆、 抗体制备及差异表达

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白 7相似蛋白（zinc transporter 7-like, ZnT-7-like）基因， 制备ZnT-7-like多克隆抗体， 了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因， 进行生物信息学分析， 为避开跨膜结构的干扰， 选择克隆其部分序列（273 bp）作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1， 转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 （DE3）中诱导表达获得融合蛋白， 然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体， 分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性， 最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因， 大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达； 制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000， 且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异， 表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄（P<0.01）， 12日龄表达量最低， 其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著（P<0.01）； ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因， 制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体， 并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。

Gene cloning,polyclonal antibody preparation and differential expression of zinc transporter 7-like (ZnT-7-like) in Apis mellifera carnica (Hymenoptera: Apidae)