| 核酸去甲基酶AlkB在毕赤酵母中的表达纯化及在tRNA相关研究中的应用 |
| |
| 引用本文： | 崔璐瑶,李安娜,林茹,张嘉禛,施嘉诚,周勉.核酸去甲基酶AlkB在毕赤酵母中的表达纯化及在tRNA相关研究中的应用[J].微生物学报,2023,63(3):1088-1098. |
| |
| 作者姓名： | 崔璐瑶 李安娜 林茹 张嘉禛 施嘉诚 周勉 |
| |
| 作者单位： | 华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237 |
| |
| 基金项目： | 国家重点研发计划（2018YFA0900300）；上海市青年科技启明星计划（19QA1402600） |
| |
| 摘 要： | 目的]核酸的甲基化修饰是一种常见的化学修饰形式,具有重要的生物学功能,却也在一定程度上给一些核酸研究过程带来了技术难度。tRNA上具有的大量甲基化修饰会阻碍逆转录进程,从而降低荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和高通量测序对其的检测效率。来自大肠杆菌(Escherichia coli)的AlkB蛋白是一种多功能的脱烷基化酶,可以去除DNA和RNA上多种甲基化为代表的修饰,有望解决以上问题。方法]针对大肠杆菌来源的AlkB,分别尝试在大肠杆菌和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中进行诱导表达和纯化,对纯化获得的AlkB进行酶学性质测定。最后以tRNAUAUIle等两种tRNA为代表,研究AlkB的处理对于荧光定量PCR法检测tRNA表达水平的影响。结果]AlkB在大肠杆菌中表达时多以包涵体形式存在,但是在毕赤酵母中可以成功分泌表达。使用镍柱分离纯化后获得了纯度高于95%的AlkB蛋白,其酶学性质参数如...
|
| 关 键 词： | 毕赤酵母 去甲基酶 AlkB tRNA 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2022/7/14 0:00:00 |
Nucleic acid demethylase AlkB in Pichia pastoris: expression, purification, and application in tRNA-related research |
| |
| CUI Luyao,LI Ann,LIN Ru,ZHANG Jiazhen,SHI Jiacheng,ZHOU Mian.Nucleic acid demethylase AlkB in Pichia pastoris: expression, purification, and application in tRNA-related research[J].Acta Microbiologica Sinica,2023,63(3):1088-1098. |
| |
| Authors: | CUI Luyao LI Ann LIN Ru ZHANG Jiazhen SHI Jiacheng ZHOU Mian |
| |
| Institution: | State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Pichia pastoris demethylase AlkB tRNA enzyme property |
| 本文献已被 维普 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《微生物学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《微生物学报》下载免费的PDF全文 |
|
