| 慢病毒载体介导RAB27A基因过表达对人HepG2肝癌细胞增殖的影响 |
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| 引用本文： | 刘雪杰,林巍然,唐立春,孙薇,魏汉东,姜颖.慢病毒载体介导RAB27A基因过表达对人HepG2肝癌细胞增殖的影响[J].中国生物工程杂志,2014,34(9):16-23. |
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| 作者姓名： | 刘雪杰 林巍然 唐立春 孙薇 魏汉东 姜颖 |
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| 作者单位： | 1. 安徽医科大学 合肥 230032;
2. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所 蛋白质组学国家重点实验室 北京蛋白质组研究中心 北京 102206 |
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| 基金项目： | 国家“973”计划(2013CB910502);国家自然科学基金面上项目(30972909)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建RAB27A基因慢病毒表达载体,并研究RAB27A对人HepG2肝癌细胞增殖能力的影响。方法:以pEGFP-C1-RAB27A质粒为模板,PCR扩增出融合绿色荧光蛋白的RAB27A基因全长,酶切后插入穿梭载体pENTR/U6,再应用Gateway技术,基因重组到表达载体pHAGEEF1α-puro-DEST上,构建得到重组慢病毒表达载体pHAGE-GFP-RAB27A-puro。测序鉴定序列正确后,将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转HEK-293T细胞进行慢病毒包装。收集并浓缩培养上清以获得慢病毒颗粒感染HepG2细胞。荧光显微镜下观察HEK-293T细胞和慢病毒感染HepG2细胞绿色荧光强度;Western blot检测稳定感染HepG2细胞株RAB27A蛋白表达水平;CCK8和平皿克隆形成实验检测稳定过表达RAB27A的HepG2细胞增殖活力的变化;流式细胞术检测稳定过表达RAB27A的HepG2细胞周期分布情况。结果:经双酶切及测序结果证实重组慢病毒表达载体构建正确;浓缩后病毒滴度较高;重组慢病毒感染HepG2细胞后,细胞外源RAB27A的蛋白表达水平显著上调,HepG2细胞的增殖活力和克隆形成能力受到明显抑制(P0.01),S期细胞分布比例明显降低(P0.01)。结论:RAB27A基因重组慢病毒表达载体构建成功,外源过表达RAB27A基因可显著抑制HepG2细胞增殖能力。RAB27A在肝细胞癌发生发展和迁移中扮演了重要角色。
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| 关 键 词： | RAB27A 慢病毒 细胞增殖 肝细胞癌 |
| 收稿时间： | 2014-04-27 |
Construction of Lentiviral Expression Vector Expressing Human RAB27A and Investigation Its Effect on the Proliferation of HepG2 Cell Lines |
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| LIU Xue-jie,LIN Wei-ran,TANG Li-chun,SUN Wei,WEI Han-dong,JIANG Ying.Construction of Lentiviral Expression Vector Expressing Human RAB27A and Investigation Its Effect on the Proliferation of HepG2 Cell Lines[J].China Biotechnology,2014,34(9):16-23. |
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| Authors: | LIU Xue-jie LIN Wei-ran TANG Li-chun SUN Wei WEI Han-dong JIANG Ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RAB27A Lentivirus Hepatocellular carcinoma Cell proliferation |
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