| 人源TNFα的原核表达及活性测定 |
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| 引用本文： | 李翠琳,张帆,陈丹扬,王昊,郭强,杜军.人源TNFα的原核表达及活性测定[J].中国生物工程杂志,2014,34(8):1-6. |
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| 作者姓名： | 李翠琳 张帆 陈丹扬 王昊 郭强 杜军 |
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| 作者单位： | 中山大学药学院微生物与生化制药实验室 广州 510006 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(2011CB935800);国家自然科学基金(81272311,81071712)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:利用SUMO标签构建人TNFα原核表达载体,通过表达及纯化获得重组蛋白,为深入研究和利用人TNFα奠定基础。方法:利用PCR技术,从质粒pET32a-hTNFα中扩增出人TNFα成熟肽编码序列,并在其上游添加SUMO标签,与原核表达载体pET28a连接,构建表达质粒pET28a-SUMO-hTNFα。在BL21(DE3)工程菌中表达融合蛋白,经Ni-NTA纯化体系纯化,切除SUMO标签,纯化获得hTNFα成熟蛋白。CCK-8法检测TNFα对L929细胞的细胞毒性,以测定TNFα的生物学活性。结果:成功构建pET28a-SUMO-hTNFα原核表达质粒,酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在BL21(DE3)工程菌中实现了融合蛋白的可溶性表达。经纯化、水解酶切除标签及再次纯化获得hTNFα成熟肽。CCK-8法检测得所制备的TNFα蛋白ED50约为12.8μg/ml。结论:成功构建原核表达载体pET28a-SUMO-hTNFα,经表达、纯化、酶切及再纯化,获得有生物活性的hTNFα蛋白,为深入研究和利用hTNFα奠定基础。
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| 关 键 词： | TNF&alpha SUMO 原核表达 生物学活性 |
| 收稿时间： | 2014-04-08 |
Study of Prokaryotic Expression and Biological Activity of Homo sapiens Kras Protein |
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| LI Cui-lin,ZHANG Fan,CHEN Dan-yang,WANG Hao,GUO Qiang,DU Jun.Study of Prokaryotic Expression and Biological Activity of Homo sapiens Kras Protein[J].China Biotechnology,2014,34(8):1-6. |
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| Authors: | LI Cui-lin ZHANG Fan CHEN Dan-yang WANG Hao GUO Qiang DU Jun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | TNFα SUMO Prokaryotic expression Biological activity |
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