节瓜ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化 |
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引用本文: | 赵芹,谢大森,罗少波,彭庆务,李明珠,李海达.节瓜ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化[J].生物技术通报,2014(9). |
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作者姓名: | 赵芹 谢大森 罗少波 彭庆务 李明珠 李海达 |
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作者单位: | 广东省农业科学院蔬菜研究所; |
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基金项目: | 广州市珠江科技新星项目(2013086);广东省自然科学博士启动基金项目(10451064001006063);国家自然科学青年基金(31311643) |
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摘 要: | 旨在开展节瓜种质资源分类鉴定与遗传多样性研究。通过正交试验设计与单因素分析相结合的方法,对节瓜ISSR-PCR反应体系5个因素(模板DNA浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度与Taq聚合酶浓度)在4个水平上进行优化分析,建立了节瓜稳定可靠且具丰富多态性的最佳反应体系,进而对引物退火温度进行梯度试验分析。结果表明,20μL节瓜ISSRPCR最佳反应体系为70 ng模板DNA、0.2 mmol/L dNTP、1.2 mmol/L Mg2+浓度、0.96μmol/L引物、0.8 U Taq DNA聚合酶和2.0μL10×buffer;引物IS807最佳退火温度为53℃。以此为基础,利用4条引物对4份节瓜种质进行最佳反应体系稳定性验证,证明该体系稳定可靠、扩增谱带清晰、多态性丰富且重复性较好。
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关 键 词: | 节瓜 ISSR-PCR 正交优化 梯度PCR 退火温度 |
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