| 正交试验优化八角ISSR-PCR反应体系 |
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| 引用本文： | 冯丹,宁德鲁,陈少瑜,李勇杰,张艳丽,吴涛,陈海云.正交试验优化八角ISSR-PCR反应体系[J].生物技术通报,2014(8). |
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| 作者姓名： | 冯丹 宁德鲁 陈少瑜 李勇杰 张艳丽 吴涛 陈海云 |
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| 作者单位： | 云南省林业科学院;云南省森林植物培育与开发利用重点试验室 |
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| 基金项目： | 云南省“十一五”科技攻关项目(2006NG26);云南省自然科学基金项目(2010ZC234) |
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| 摘 要： | 利用正交试验设计研究Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物(UBC 886)、dNTP、Mg2+浓度5个因素对云南八角ISSR-PCR反应的影响,建立其最佳反应体系。结果表明:25μL的反应体系中5个因子的最佳水平为:Mg2+3 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、DNA模板0.016 ng、引物0.8μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L。PCR最佳反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,46℃退火45 s,72℃延伸1 min,40次循环;72℃最后延伸7 min,4℃保存。
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| 关 键 词： | 八角 ISSR-PCR反应 正交设计 体系优化 |
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