| 人乳头瘤病毒6b型E7蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 汤怡,周强,王琦,程浩.人乳头瘤病毒6b型E7蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].病毒学报,2011,27(5):416-420. |
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| 作者姓名： | 汤怡 周强 王琦 程浩 |
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| 作者单位： | 浙江大学 医学院附属邵逸夫医院皮肤科,杭州,310016;浙江大学 医学院 附属邵逸夫医院 中心实验室,杭州,310016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(81071302); 浙江省卫生高层次创新人才培养计划 |
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| 摘 要： | 进行人乳头瘤病毒6b型(Human papillomavirus type 6b,HPV6b)E7蛋白原核表达并制备其多克隆抗体。用已构建的pGEX-4T-2/HPV6bE7原核表达载体诱导表达大量可溶性融合蛋白GST-HPV6bE7,用Glutathione-Sepharose 4B亲和柱和凝血酶纯化获取HPV6b型E7蛋白。将纯化的E7蛋白免疫新西兰兔并纯化为多克隆抗体IgG。采用Western-Blot及免疫荧光法分析该抗体的效价及特异性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导3～6h后pGEX-4T-2/HPV6bE7表达载体在大肠杆菌中高水平表达可溶性融合蛋白。纯化的E7蛋白免疫新西兰兔后可获得兔多克隆抗体IgG。经Western-Blot及免疫荧光鉴定,兔抗IgG具有高效价性和抗HPV6bE7蛋白特异性。获取纯化的HPV6b型E7蛋白具有较好的免疫原性,其免疫兔产生的多克隆抗体IgG效价高,特异性好,有望进一步用于HPV6b型的生物学功能研究和免疫学效应研究。
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| 关 键 词： | 人乳头瘤病毒 E7蛋白 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of HPV6b E7 protein |
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| Tang Yi,Zhou Qiang,Wang Qi,Cheng Hao.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of HPV6b E7 protein[J].Chinese Journal of Virology,2011,27(5):416-420. |
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| Authors: | Tang Yi Zhou Qiang Wang Qi Cheng Hao |
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| Institution: | TANG Yi,ZHOU Qiang,WANG Qi,CHENG Hao (Department of Dermatology and Venereology,School of Medicine,Sun Run Run Shaw Hospital,Zhejiang University,Hangzhou 310016,China) |
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| Abstract: | To express and prepare polyclonal antibody of Human papillomavirus type 6b(HPV6b) E7 protein.a prokaryotic expression vector pGEX-4T-2/HPV6b E7 was constructed and GST-HPV6b E7 fusion protein was expressed as a soluble protein in E.coli.The expressed fusion protein was purified via Glutathione-Sepharose 4B column and thrombin cleavage in order to obtain HPV6b E7 protein.Polyclonal IgG antibody was prepared by immunizing New-Zealand rabbits with HPV6b E7 protein.Western-Blot and immunofluorescence analysis s... |
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| Keywords: | Human papillomavirus E7 protein Polyclonal antibody |
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