动物细胞双顺反子高效稳定表达系统建立

建立稳定高效的动物细胞表达系统对于许多重组蛋白质药物的工业化生产有着十分重大的意义。用PCR扩增得到dhfr基因 ,克隆入载体pIRESneo3基因以替换原有的neo^r 基因 ,并将hbFGF作为报告基因插入其多克隆位点 ,得到重组子pIRESdhfr hbFGF ,转导CHO细胞后 ,MTX浓度梯度筛选稳定表达hbFGF的细胞株 ,ELISA与WesternBlot检测培养基中hbFGF的分泌表达。结果发现10、100、1000nmol LMTX组均检测到hbFGF的表达 ,其中表达量最高的一株细胞传代20次后表达量仍能维持较高的水平。因此利用双顺反子表达系统可以实现外源基因在动物细胞中的高效稳定表达 。