| Met662和Asp1828的Cys突变增强蛋白内含子对共表达的BDD-FVIII因子重链和轻链的剪接 |
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| 引用本文： | 朱甫祥,刘泽隆,缪静,屈慧鸽,迟晓艳.Met662和Asp1828的Cys突变增强蛋白内含子对共表达的BDD-FVIII因子重链和轻链的剪接[J].中国生物化学与分子生物学报,2012,28(3):234-239. |
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| 作者姓名： | 朱甫祥 刘泽隆 缪静 屈慧鸽 迟晓艳 |
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| 作者单位： | 鲁东大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金(No.ZR2010CM061);烟台市科技计划项目(No.2008152);教育部留学回国人员科研启动基金(No.20071108)~~ |
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| 摘 要： | 本文旨在通过B区缺失型凝血因子8(BDD-FVⅢ)重、轻链间二硫键形成，改善蛋白质反式剪接效率，提高双载体转BDD FVⅢ基因功效. 将BDD-FVⅢ重链A2区的Met662和轻链A3区的Asp1828突变为Cys，用蛋白内含子融合的重链和轻链基因共转染HEK293细胞，Western印迹检测到细胞内BDD-FVⅢ剪接量的提高以及重、轻链间二硫键的形成，用ELISA和Coatest测得细胞分泌至培养上清的剪接BDD-FVⅢ的量(119±14 ng/mL)和活性(1.06±0.08 IU/mL)，明显高于野生型BDD FVⅢ重链和轻链基因共转染细胞的量(81±12 ng/mL)和活性(0.70±0.15 IU/mL)；混合培养的转突变重链和轻链基因细胞培养基中剪接BDD FVⅢ的量(17±5 ng/mL)和活性(0.15±0.03 IU/mL)，与混合培养的转野生型重链和轻链基因细胞 (分别为21±9 ng/mL和0.18±0.05 IU/mL)相近，反映不依赖细胞机制的蛋白质反式剪接. 结果表明，重、轻链间二硫键形成通过增强蛋白质反式剪接提高双载体转BDD FVⅢ基因的功效. 为进一步运用双AAV载体动物体内转BDD-FVⅢ基因提供了实验依据.
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| 关 键 词： | B区缺失型凝血因子8 共表达 二硫键 蛋白内含子 蛋白质反式剪接 |
| 收稿时间： | 2011-12-05 |
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