| aroA-In融合基因载体的构建、表达及对烟草的转化 |
| |
| 引用本文： | 赵瑾,高素琴,费云标,魏令波. aroA-In融合基因载体的构建、表达及对烟草的转化[J]. 遗传学报, 2004, 31(11): 1294-1301 |
| |
| 作者姓名： | 赵瑾 高素琴 费云标 魏令波 |
| |
| 作者单位： | 中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京,100080 |
| |
| 基金项目： | 中国科学院生物科学与生物技术研究特别资助 (编号 :S2 0 0 10 4)~~ |
| |
| 摘 要： | PCR扩增突变的5’-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5’-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthetase，EPSPS)cDNA全长序列，插入pLitmus28得到pLEPSPS，进而通过反向PCR在EPSPS235／236aa之间将其打断为无功能的片段。选用人工构建的具有顺式和反式剪接功能的mini型蛋白内含子Ssp DnaB和Rma DnaB，插入被打断的aroA(抗除草剂基因)，构建了质粒pLEBC、pLEBT、pLERC和pLERT。将4种重组质粒中的aroA-In(蛋白内含子Intein插入aroA)融合基因插入pET-32得到表达载体pETLEBC、pETLEBT、pETLERC和pETLERT，lPTG诱导后，SDS-PAGE分析显示其能在DE。中有效表达并发生相应的蛋白剪接。将aroA-cis Ssp DnaB和aroA-cis Rma DnaB融合基因分别插入pLYM中进一步构建成植物表达载体，农杆菌叶盘法转化烟草。基因组PCR分析表明融合基因整合入植物核基因组；RT-PCR分析显示其可在高等植物细胞中成功表达。结果说明蛋白内含子基因可以转化高等真核细胞，蛋白剪接技术可应用于高等植物细胞，从而为防止植物转基因扩散提供了一条新的途径。
|
| 关 键 词： | 蛋白剪接 EPSPS 转基因 烟草 |
| 文章编号： | 0379-4172(2004)11-1294-08 |
Construction and Expression of Vector with aroA-In Gene and Its Transformation in Tobacco |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | protein splicing EPSPS genetic transformation Nicotiana tabacum |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
