| 接合转移质粒pUCP24T的构建与性能研究 |
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| 作者姓名： | 陈树林 陈茶 黄彬 张妮 鄂顺梅 蔡壬辛 袁慧 曲平华 林冬玲 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学附属第一医院检验医学部,广东广州,510080
2. 广东省中医院检验医学部,广东广州,510006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目,广东省医学科研基金资助项目,广东省科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建能在大肠埃希菌(E.coli)和铜绿假单胞菌(PA)间高效接合转移的质粒.方法 通过NCBI blastn程序分析质粒pCVD442接合反应起始序列oriT,PCR扩增oriT后插入pMD18-T,再将pMD1 8-oriT转化E.coli DH5α,经酶切、测序验证后用SmaI和HindIIII双酶切亚克隆至质粒pUCP24,获得质粒pUCP24T,将pUCP24T转化E.coli后研究pUCP24T从E.coli到PA的接合效率和质粒稳定性等.结果 成功构建pUCP24T重组质粒,在E.coli和PA的接合实验中,E.coli(pUCP24T)-PA共培养2h的接合效率平均为3.588×10-2,按12 h一代连续9代继代培养108 h,抗生素压力下质粒保存率为98.29％,无抗生素的培养基中质粒保存率为21.76％.结论 成功构建高接合效率的接合转移质粒pUCP24T.
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| 关 键 词： | 铜绿假单胞菌 接合性质粒 基因水平转移 |
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