CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的序列分析与原核表达

目的对大肠埃希菌所产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）进行基因克隆和重组表达，探讨其特性。方法以产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌12号菌总基因组DNA为模板，PCR扩增CTX-M-14，将其克隆入pUCm-T Vector载体后测定该核苷酸序列；再将基因编码区克隆到原核表达载体pET-28α，构建含CTX-M-14基因的重组表达质粒，转化到大肠埃希菌BL21中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳鉴定表达的酶蛋白后再过Ni-NTA柱纯化。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段，与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100％。大肠埃希菌BL21转化pET-28a／CTX-M-14重组质粒后，ESBLs试验为阳性。此基因能在大肠埃希菌中大量表达，SDS-PAGE电泳显示蛋白分子质量大约为30KD。结论成功表达重组的CTX-M-14型酶，为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。