| 可诱导型敲低PICH的MDA-MB-231细胞系的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 李万金,黄燕,吕璐冶,韩秋影,周涛,陈亮.可诱导型敲低PICH的MDA-MB-231细胞系的构建及鉴定[J].生物技术通讯,2019(2):153-157. |
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| 作者姓名： | 李万金 黄燕 吕璐冶 韩秋影 周涛 陈亮 |
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| 作者单位： | 国家生物医学分析中心; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81872153) |
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| 摘 要： | 目的:构建稳定表达可诱导型polo样激酶1相关检查点解旋酶(PICH)短发夹RNA(shRNA)的三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231,并通过检测加入诱导剂后细胞的增殖评价敲低效果。方法:设计并合成2条特异靶向PICH的shRNA序列,用分子克隆技术构建pLKO.1-tet-on-shPICH-Puromycin质粒,经菌落PCR及基因测序验证;慢病毒包装并感染细胞,通过抗性筛选获得嘌呤霉素抗性的细胞;经强力霉素(DOX)诱导表达后,Western印迹检测PICH的敲低效果,并通过MTT法对细胞增殖进行检测。结果:菌落PCR凝胶电泳及DNA测序结果显示pLKO.1-tet-on-shPICHPuromycin质粒构建成功;Western印迹结果表明,在DOX诱导下,MDA-MB-231细胞中的PICH蛋白质表达下降,表明可诱导型PICH稳定敲低细胞系构建成功;进一步实验结果显示,MDA-MB-231细胞的增殖随PICH的表达下调而受到显著抑制。结论:构建了可诱导稳定敲低PICH的三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231,为进一步研究PICH在三阴乳腺癌中的作用以及具体的分子机制奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | polo样激酶1相关检查点解旋酶(PICH) 三阴乳腺癌 可诱导稳定敲低 细胞增殖 |
Establishment and Identification of MDA-MB-231 Cell Line with Stable Expression of Inducible PICH shRNA |
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| LI Wan-Jin,HUANG Yan,LYU Lu-Ye,HAN Qiu-Ying,ZHOU Tao,CHEN Liang.Establishment and Identification of MDA-MB-231 Cell Line with Stable Expression of Inducible PICH shRNA[J].Letters in Biotechnology,2019(2):153-157. |
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| Authors: | LI Wan-Jin HUANG Yan LYU Lu-Ye HAN Qiu-Ying ZHOU Tao CHEN Liang |
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| Institution: | (National Center of Biomedical Analysis,Beijing 100850,China) |
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| Abstract: | LI Wan-Jin;HUANG Yan;LYU Lu-Ye;HAN Qiu-Ying;ZHOU Tao;CHEN Liang(National Center of Biomedical Analysis,Beijing 100850,China) |
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| Keywords: | polo-like kinase 1-interacting checkpoint helicase(PICH) triple-negative breast cancer inducible knockdown cell proliferation |
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