| 噬菌体抗体库技术筛选抗VEGF165单克隆抗体 |
| |
| 引用本文： | 詹明硕,刘方杰,张亚兰. 噬菌体抗体库技术筛选抗VEGF165单克隆抗体[J]. 生物技术通讯, 2019, 0(3): 348-353 |
| |
| 作者姓名： | 詹明硕 刘方杰 张亚兰 |
| |
| 作者单位： | 北京城市学院生物医药学部;北京天广实生物技术股份有限公司 |
| |
| 基金项目： | 北京城市学院2018年度实培计划 |
| |
| 摘 要： | 目的:获得抗血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并对其功能进行初步验证。方法:利用噬菌体抗体库展示技术筛选与VEGF165结合的噬菌体克隆并测序,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,PCR扩增抗体的轻重链可变区基因,并克隆至哺乳动物细胞表达载体中,构建全抗体表达载体;将全抗体表达载体转染293E细胞,收取培养细胞上清,利用ProteinA亲和纯化抗体;通过结合ELISA、表面等离子共振检测抗体的亲和力,以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为模型验证抗体功能。结果:经过噬菌体抗体库展示技术筛出1个与VEGF165特异性结合的抗体序列VG2;293E细胞表达了VG2全抗体蛋白,SDS-PAGE显示VG2抗体纯度较高;BIAcore检测结果表明该抗体具有较高亲和力(KD=0.56nmol/L),竞争抑制ELISA结果表明VG2抗体能抑制VEGF与VEGF受体(VEGFR)的结合(IC50为1.470μg/mL),进一步实验结果表明VG2能够抑制VEGF引起的HUVEC增殖。结论:制备了靶向VEGF165的全人源单克隆抗体VG2,该抗体具有较高的亲和力,能阻断VEGF165/VEGFR2的结合,并抑制HUVEC的增殖,可以作为潜在药物应用于肿瘤治疗。
|
| 关 键 词： | 血管内皮生长因子 噬菌体抗体库技术 单克隆抗体 |
Screening of Anti-VEGF165 Monoclonal Antibodies by Phage Antibody Library Technology |
| |
| ZHAN Ming-Shuo,LIU Fang-Jie,ZHANG Ya-Lan. Screening of Anti-VEGF165 Monoclonal Antibodies by Phage Antibody Library Technology[J]. Letters in Biotechnology, 2019, 0(3): 348-353 |
| |
| Authors: | ZHAN Ming-Shuo LIU Fang-Jie ZHANG Ya-Lan |
| |
| Affiliation: | (Department of Biology and Medicine, Beijing City University, Beijing 100083;Beijing Mabworks Biotech Co.Ltd., Beijing 100176, China) |
| |
| Abstract: | ZHAN Ming-Shuo;LIU Fang-Jie;ZHANG Ya-Lan(Department of Biology and Medicine, Beijing City University, Beijing 100083;Beijing Mabworks Biotech Co.Ltd., Beijing 100176, China) |
| |
| Keywords: | vascular endothelial growth factor phage antibody library technology monoclonal antibody |
| 本文献已被 CNKI 维普 等数据库收录！ |
|
