三种重要水果褐腐病菌快速检测试纸的研制 |
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引用本文: | 林惠娇,杨华卫,古恒森,蒋湘,张海磊,刘昱辰,周而勋.三种重要水果褐腐病菌快速检测试纸的研制[J].生物技术通报,2019(6). |
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作者姓名: | 林惠娇 杨华卫 古恒森 蒋湘 张海磊 刘昱辰 周而勋 |
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作者单位: | 黄埔海关;江苏猎阵生物科技有限公司;华南农业大学农学院 |
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摘 要: | 以水果上3种重要的褐腐病菌,即美澳型核果褐腐菌(Monilinia fructicola)、核果褐腐菌(M. laxa)和仁果褐腐菌(M.fructigena)为检测对象,研究开发适用于口岸水果检疫的快速检测试纸。以硝酸纤维素膜为固相载体,以病菌翻译延长因子基因(Translation elongation factor 1-alpha,EF-1α)为检测靶标,生物素标记的PCR扩增产物为检测标记物,采用DNA-DNA杂交方式对3种褐腐病菌进行试纸法快速检测。分别以褐腐病菌DNA和本研究构建的EF-1α重组质粒DNA为阳性标准品检验试纸的特异性和灵敏度。试验结果表明,本研究开发的检测试纸能够同时特异地检出以上3种褐腐病菌,整个检测流程(包括DNA提取和扩增过程)在2 h内即可完成,最低检测限达到10 fg/μL。其特异性强、灵敏度高、稳定性好,且检测结果可肉眼判定,无需依赖昂贵设备,便于向基层检疫实验室推广使用。
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