| 重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor Kazal结构域的原核表达、纯化及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 冯洁,伦永志,李越,武会娟,李宝明,魏玲,张小莉,王雪蕾,迟庆.重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor Kazal结构域的原核表达、纯化及活性鉴定[J].生物工程学报,2013,29(11):1607-1616. |
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| 作者姓名： | 冯洁 伦永志 李越 武会娟 李宝明 魏玲 张小莉 王雪蕾 迟庆 |
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| 作者单位： | 大连大学医学院 辽宁省高校生物物理学重点实验室，辽宁 大连 116622；大连大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116622;大连大学医学院 辽宁省高校生物物理学重点实验室，辽宁 大连 116622;北京市理化分析测试中心，北京 100094;北京市理化分析测试中心，北京 100094;北京市理化分析测试中心，北京 100094;北京市理化分析测试中心，北京 100094;北京市理化分析测试中心，北京 100094;大连大学医学院 辽宁省高校生物物理学重点实验室，辽宁 大连 116622;大连大学医学院 辽宁省高校生物物理学重点实验室，辽宁 大连 116622 |
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| 基金项目： | 大连市科技计划项目 (No. 2010E13SF138) 资助。 |
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| 摘 要： | Hespintor是应用抑制消减杂交技术 (SSH) 从肝母细胞瘤细胞系HepG2中筛选得到的一未知功能蛋白，序列分析表明该蛋白属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子 (Serine proteinase inhibitor, Serpin) 家族中的一个分泌型新成员，具有与食管癌相关基因2 (Esophageal cancer related gene 2, ECRG2) 高度同源的Serpin基本结构。为了进一步阐明Hespintor的生物学功能，必须得到纯化的Hespintor蛋白。先将Hespintor Kazal结构域编码序列亚克隆至原核表达载体pET-40b(+)，转化至Rosetta (DE3) 表达宿主菌中。经 0.25 mmol/L IPTG，30 ℃诱导5 h获得了分子量约为42 kDa的Hespintor-Kazal重组融合蛋白的优化表达，Western blotting证实了重组蛋白的特异性。Hespintor-Kazal重组融合蛋白以包涵体形式在宿主菌中表达，利用金属螯合亲和层析和阴离子交换层析柱对重组蛋白进行两步纯化。初步的活性鉴定表明，纯化的Hespintor-Kazal重组融合蛋白能特异性抑制胰蛋白酶的水解活性，提示Hespintor具有作为一种新型抗肿瘤药物的潜在开发价值。
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| 关 键 词： | 丝氨酸蛋白酶抑制因子 Hespintor Kazal结构域 原核表达 |
| 收稿时间： | 1/8/2013 12:00:00 AM |
Prokaryotic expression, purification and activity analysis of recombinant human serine protease inhibitor Hespintor Kazal Domain |
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| Jie Feng,Yongzhi Lun,Yue Li,Huijuan Wu,Baoming Li,Ling Wei,Xiaoli Zhang,Xuelei Wang and Qing Chi.Prokaryotic expression, purification and activity analysis of recombinant human serine protease inhibitor Hespintor Kazal Domain[J].Chinese Journal of Biotechnology,2013,29(11):1607-1616. |
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| Authors: | Jie Feng Yongzhi Lun Yue Li Huijuan Wu Baoming Li Ling Wei Xiaoli Zhang Xuelei Wang and Qing Chi |
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| Institution: | Liaoning Provincial University Key Laboratory of Biophysics, College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622 Liaoning, China; College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian 116622 Liaoning, China;Liaoning Provincial University Key Laboratory of Biophysics, College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622 Liaoning, China;Beijing Center for Physical and Chemical Analysis, Beijing 100094, China;Beijing Center for Physical and Chemical Analysis, Beijing 100094, China;Beijing Center for Physical and Chemical Analysis, Beijing 100094, China;Beijing Center for Physical and Chemical Analysis, Beijing 100094, China;Beijing Center for Physical and Chemical Analysis, Beijing 100094, China;Liaoning Provincial University Key Laboratory of Biophysics, College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622 Liaoning, China;Liaoning Provincial University Key Laboratory of Biophysics, College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622 Liaoning, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | serine protease inhibitor hespintor kazal domain prokaryotic expression |
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