| 用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达cbhⅡ基因 |
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| 引用本文： | 易国辉,屠发志,张爱联,张添元,屈直,罗进贤.用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达cbhⅡ基因[J].工业微生物,2010,40(4):29-33. |
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| 作者姓名： | 易国辉 屠发志 张爱联 张添元 屈直 罗进贤 |
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| 作者单位： | 1. 中国热带农业科学院,热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海口,571101;海南大学农学院
2. 中国热带农业科学院,热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海口,571101
3. 中山大学,基因工程教育部重点实验室/生物化学系,广州,510275 |
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| 基金项目： | 国家863项目，中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目，中国热带农业科学院科研基金 |
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| 摘 要： | 用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的重组蛋白CBHⅡ达到50 mg/L。用CMC酶活法测定发酵液中的CMC酶活力为2.05 U/mL。
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| 关 键 词： | 纤维素二糖水解酶 毕赤酵母 基因表达 酶活力 |
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