集成干扰素突变体Ⅱ的分子构建、表达及提纯

目的：通过定点突变，构建集成干扰素突变体Ⅱ（IFN-Con-m2），以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇（PEG）修饰的新型药物分子。 方法：采用PCR体外定点突变技术，使集成干扰素突变体Ⅰ（IFN-Con-m1）基因的第86位密码子由TAC突变为TGC。将扩增片段克隆入pET-23b表达载体，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）。IPTG诱导后，表达的IFN-Con-m2经包含体变复性、疏水层析、DEAE层析和凝胶过滤层析等纯化后，用WISH-VSV系统进行生物活性测定。 结果：IFN-Con-m2以包涵体形式表达，表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后，IFN-Con-m2的纯度大于95%，比活性大于5.0×108IU/mg。 结论：构建了IFN-Con-m2的表达载体，并成功地在大肠杆菌中表达，获得了高活性突变分子IFN-Con-m2，建立了IFN-Con-m2的纯化工艺。