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极耐热性阿拉伯糖苷酶基因的表达、纯化及酶学性质研究
引用本文:薛业敏 毛忠贵 邵蔚蓝. 极耐热性阿拉伯糖苷酶基因的表达、纯化及酶学性质研究[J]. 微生物学报, 2004, 44(2): 220-225
作者姓名:薛业敏 毛忠贵 邵蔚蓝
作者单位:江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214036
基金项目:国家轻工总局 2 11专项基金资助~~
摘    要:采用PCR从海栖热袍菌(Thermotoga maritima)克隆出编码极耐热稳定性阿拉伯糖苷酶基因,以pET20b为表达质粒,与其C末端6个组氨酸标签序列融合,在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过热处理和亲和层析柱纯化后,酶纯度达电泳均一。纯化重组酶稳定性检测表明,阿拉伯糖苷酶活性最适作用温度和最适作用pH分别为90~95℃和pH 5.0~5.5,在pH 4.2~8.2之间酶活力稳定,95℃的半衰期为4h;SDSPAGE测得酶的分子量为56.57 kD,与理论推算值相吻合。在所测定的底物中,阿拉伯糖苷酶仅对对硝基苯阿拉伯呋喃糖苷(pNPAF)有专一性水解作用,其动力学参数Km值为018mmol/L, Vmax为139μmol/min·mg。

关 键 词:阿拉伯糖苷酶   基因表达   重组酶纯化   酶学性质
文章编号:0001-6209(2004)02-0220-06
修稿时间:2003-05-28

Expression,Purification and Characterization of Arabinofuranosidase from Thermotoga maritima
Abstract:
Keywords:Arabinofuranosidase   Gene expression   Purification   Enzyme stability
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