| 重组人胰激肽原酶复性工艺的研究 |
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| 引用本文： | 郭平川,刘大和,张允,胡蓉,李锦秀,陈刚,陈劲春. 重组人胰激肽原酶复性工艺的研究[J]. 现代生物医学进展, 2012, 12(31): 6022-6024,6041 |
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| 作者姓名： | 郭平川 刘大和 张允 胡蓉 李锦秀 陈刚 陈劲春 |
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| 作者单位： | 北京化工大学生命科学与技术学院 |
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| 摘 要： | 目的:研究重组人胰激肽原酶包涵体变性及复性的工艺。方法:对本实验室构建的重组人胰激肽原酶大肠杆菌进行IPTG诱导表达表达成功后,菌体经超声破碎释放包涵体,包涵体经洗涤、变性、稀释和尿素梯度凝胶过滤色谱这两种方法复性后(Sephadex-G75),通过测定酶活检验复性效果。结果:①重组人胰激肽原酶工程菌经过IPTG诱导后能够表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在,将细胞破碎后,包涵体经过3次洗涤,纯度达到71.93%;②变性包涵体经24小时稀释复性后,蛋白浓度达到72.61μg/m L,酶的比活达到13.84 U/mg;③变性包涵体经过2个小时的尿素梯度凝胶过滤复性后,蛋白浓度可达到830.07μg/mL,酶的比活达到48.61 U/mg。结论:两种复性方法均可以使包涵体达到一定的浓度和比活,比较发现尿素梯度凝胶过滤色谱具有复性时间短和比活力高等优点,可作为重组人胰激肽原酶复性的一种有效的手段。
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| 关 键 词： | 重组人胰激肽原酶 包涵体 凝胶过滤复性 尿素梯度 |
Research on Renaturation of Recombinant Human Kallikrein from E.coli |
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| GUO Ping-chuan,LIU Da-he,ZHANG Yun,HU Rong,LI Jin-xiu,CHEN Gang,CHEN Jin-chun. Research on Renaturation of Recombinant Human Kallikrein from E.coli[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2012, 12(31): 6022-6024,6041 |
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| Authors: | GUO Ping-chuan LIU Da-he ZHANG Yun HU Rong LI Jin-xiu CHEN Gang CHEN Jin-chun |
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| Affiliation: | △(Life Science and Biotechnology college of Beijing University of Chemical Technology,Beijing.100029,China) |
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| Abstract: | |
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