多重耐药铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因检测及 对多粘菌素B耐药机制探讨

摘要：目的 探讨多重耐药铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因检测及对多粘菌素B耐药机制情况。方法 分析2008年2月至2014年2月收集分离的菌株收集200株铜绿假单胞菌，通过琼脂稀释法和E-test法对8种抗生素进行药敏试验，通过PCR对金属β-内酰胺酶基因进行扩增，在对多重耐药铜绿假单胞菌进行体外诱导，获得多粘菌素B的耐药菌株，观察临床分离株和诱导株pmrAB和phoPQ基因扩增和测序情况。结果 200株铜绿假单胞菌对于亚胺培南、美罗培南、环丙沙星、头孢哌酮/舒巴坦耐药率均高于30%，200株铜绿假单胞菌对于阿米卡星耐药率最低仅为10%，敏感率最高达到90%。200株铜绿假单胞菌对于多粘菌素B药敏试验中197株敏感，3株中介，无耐药发生。通过B100、B108、B925三株临床分离株和多粘菌素B诱导耐药株B100d、B108d、B925d的phoP、phoQ和pmrB基因进行扩增。其中B108d号菌株的pmrB基因有两个点突变，在第5365842位的碱基发生了从GGC到AGC的突变，即361个G氨酸变成了S氨酸；第5365864位的碱基发生率从TCG到CCG突变，第368个S氨酸转变为P氨酸。B108d号菌株的1278614位点的碱基从TAC到TTC的突变，第84个Y氨酸变为F氨酸。另外B108d号菌株的phoQ基因中1278416-1278527位的基因发生缺失，进而缺失了152个氨基酸。结论 铜绿假单胞菌耐药率较高，但是没有出现多粘菌素B耐药菌株，诱导出的多粘菌素B耐药的多重铜绿假单胞菌PCR扩增后，出现了pmrB和phoQ基因的碱基突变，同时还有部分DNA片段缺失。