| β-甘露聚糖酶末端残基变体对其酶学特性的影响 |
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| 作者姓名： | 唐存多 李剑芳 邬敏辰 魏喜换 赵梅 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（No. 31271811）,江南大学博士研究生培育基金（No. JUDCF11011）和江苏省研究生创新工程项目（No. CXZZ11_0480） |
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| 摘 要： | 本研究用宇佐美曲霉Aspergillus usamii的5家族β-甘露聚糖酶AuMan5A为母本,借助同源建模、分子对接及分子动力学模拟等理性设计方法,将AuMan5A的N-末端和C-末端分别截去3个无规则的氨基酸残基,构建出截短的β-甘露聚糖酶 AuMan5AN3C3.将AuMan5A和AuMan5AN3C3的编码基因分别在毕赤酵母GS115中进行表达,对表达产物进行了初步纯化并分析比较了其酶学特性及各自的表达水平. 结果表明,reAuMan5A和reAuMan5AN3C3的最适温度Topt均为70 ℃,reAuMan5AN3C3在60 ℃的半衰期t1/260为38 min,较reAuMan5A（t1/260=40 min）略有降低;在相同表达条件下,reAuMan5AN3C3上清液的β-甘露聚糖酶活性为73.4 U/mL,较reAuMan5A 的52.8 U/mL提高了39.0%;纯化的reAuMan5AN3C3酶比活性为182.7 U/mg protein,较reAuMan5A的126.3 U/mg protein提高了44.7%. 与reAuMan5A相比,reAuMan5AN3C3对角豆胶的Km值下降不明显,Vmax值有显著提高.
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| 关 键 词： | β-甘露聚糖酶 ,理性设计,末端残基变体 ,表达 酶学性质, |
| 收稿时间： | 2013-02-27 |
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