赭曲霉11α羟化酶的克隆表达及关键氨基酸位点分析

11α,17α-双羟基黄体酮是甾体激素类药物的重要中间体，工业上主要利用霉菌对17α-羟基黄体酮的11α羟化反应制备。对赭曲霉的11α羟化酶及其关键氨基酸位点展开研究，为深入解析酶的催化机理提供基础数据。利用底物转化实验探究了10个羟化反应常用霉菌对17α-羟基黄体酮的转化能力，考察了赭曲霉来源的11α羟化酶CYP68J5在不同表达系统中的活性，借助结构预测、分子对接和定点突变等手段对CYP68J5的关键氨基酸位点进行解析。结果表明，赭曲霉的转化能力最强，转化时间60 h的摩尔产率达到最大值，为78.55%；其羟化酶CYP68J5在酿酒酵母中的表达活性最高；位于底物结合口袋附近的D118、F216、M488是CYP68J5的关键氨基酸位点，这些位点在维持酶的结构稳定性上发挥重要作用，是后续分子改造的潜在重要靶点。