体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用

根据汉坦病毒76—118株M基因和β3整合素基因序列设计引物，分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81-140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS—PAGE检测G2片段在BL21表达菌中诱导表达及纯化的效果，Wester blot检测β3整合素片段在真核细胞中的表达。将在BL21裂解上清中表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段（G2N81～140）纯化后与经过GST蛋白预处理的含有β3整合素片段的细胞裂解上清进行孵育，同时以未做任何转染的HEK293细胞裂解上清和无关蛋白GST～TLM作为阴性对照，通过GST Pull—down验证G2蛋白与β3整合素之间的相互作用。结果显示在Pull—down所获蛋白复合物中检测到β3整合素27-133位氨基酸片段产物的存在。结果表明G2蛋白与β3整合素之间可能存在有直接的相互作用，为β3整合素作为汉坦病毒细胞膜受体提供了进一步证据。