大口黑鲈致死性结节病病原的分离、鉴定及组织病理学观察

为探究鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)强毒株LY20810 F1与其传代弱毒株LY20810 F110的特性差异, 比较了两个菌株的生物学特征、毒力基因序列、致病力及引起大口黑鲈免疫反应的差异, 并评价了弱毒株LY20810 F110对大口黑鲈的免疫保护效果。结果表明, 通过BHI培养基连续传代培养110代次后, 菌株LY20810 F110的菌落、菌体形态发生显著变化, 其生长速度较原始毒株LY20810 F1快1倍以上。通过比较两株菌的10个毒力基因序列, 发现菌株LY20810 F110的SodC和ESAT6基因发生了单位点突变。致病力测试结果显示, 强毒株LY20810 F1以0.1 mL 1×10⁷ cfu/mL攻毒剂量感染大口黑鲈, 30d内鱼累积死亡率为100%, 而传代弱毒株LY20810 F110在相同剂量下未造成鱼死亡。
强毒株LY20810 F1攻毒3d后引起脾脏、头肾中IL-1β 、IL-10、TNF-α、IFN-γ等炎症细胞因子显著上调, 表明细菌感染引起炎症风暴。传代弱毒株LY20810 F110在感染中后期(14d和28d)诱导包括IgM、CD4-α、CD8-α、MHCI-α等8种免疫因子的上调。免疫效果评价结果显示, 弱毒株LY20810 F110的注射、浸泡免疫(1×10⁸ cfu/mL)对大口黑鲈的相对保护率分别为75.0%和66.7%, 有效降低了鰤鱼诺卡氏菌入侵造成大口黑鲈脾脏和头肾的病理损伤。以上结果表明, 鰤鱼诺卡氏菌传代弱毒株LY20810 F110是安全有效的弱毒疫苗候选株, 将为诺卡氏菌减毒疫苗的研制提供科学依据。