风信子花器官中HAP2基因的分离与表达研究(英文)

在离体条件下，以风信子花被片为外植体，通过控制激素的浓度可诱导花被片、雄蕊或胚珠的再生。近年来，在拟南芥和金鱼草等模式植物中已经分离出了许多控制花器官发育的同源异形基因，如AG，AP1，AP2，AP3等，其中AP2在控制花萼和花瓣形成过程中起重要作用，因此本文从风信子中分离AP2的同源基因，并对它在风信子再生系统中的表达进行了分析。根据AP2同源基因功能域的保守序列设计一对简并引物：5'-TGGGA（A/G）TC（G/T/C）CA（C/T）AT（C/T）TGGA-3'和5'-TCCCA(AGC)(CT)(GT)(AG)CC(AG) CA(CT)TT(AG)TG-3', 以再生的花被片为材料进行RT-PCR，扩增出大小约300bp的片段，序列分析表明该片段的氨基酸序列与AP2同源性高达89%。进而，利用5’和3’Race PCR，得到全长的cDNA。该基因命名为HAP2，GenBank登记号为AF134116，该基因全长1597bp，编码368个氨基酸(Fig.1）。与AP2相比，HAP2也含有10个氨基酸长的碱性功能域，其中KKSR为核定位信号。此外，HAP2也含有两个序列重复的68个氨基酸长的功能域（HAP2-R1，HAP2-R2），HAP2-R1也含有能形成(-螺旋结构的核心区域，且与AP2-R1中的核心序列100%同源，而HAP2-R2中的核心区域与AP2-R2相比, 缺少9个氨基酸(Fig.2）。RT-PCR结合Southern 杂交结果表明(Fig.3），HAP

Isolation and Expression of HAP2, A Homolog of AP2 in Hyacinthus orientalis L.

By precisely controlling exogenous hormones applied in the cultural process, particular type of floral organs, such as tapels, stamens, or ovules, can be regenerated from perianth explant of Hyacinthus orientalis L. To further study the molecular mechanism of the specific organgenesis in the system, an AP2 homolog, HAP2 was isolated from regenerated tepals by using RT-PCR. Results from RT-PCR combined with Southern hybridization showed that HAP2 was expressed in leaves, perianth, regenerated tepals and regenerated stamens. The possible functions of HAP2 on hormone-regulated floral organ regeneration are discussed.