果蝇Hsp83多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备和鉴定抗Hsp83蛋白的多克隆抗体。方法利用PCR技术从果蝇cDNA中获得hsp83基因片段,构建重组质粒;将其转化到BL21(DE3)菌株中诱导蛋白表达,利用Ni-NTA亲和法纯化重组蛋白;再将纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体;利用免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光染色法检测多克隆抗体的特异性。结果构建的pET28ahsp83质粒在大肠杆菌中成功表达了Hsp83融合蛋白,蛋白纯化后作为抗原免疫小鼠,获得了抗Hsp83的多克隆抗体。免疫印迹法和免疫荧光染色法检测显示,抗果蝇Hsp83多克隆抗体具有较高的特异性,并能检测出内源性Hsp83蛋白。果蝇卵巢免疫荧光染色显示,Hsp83蛋白定位在卵巢细胞的细胞质中。结论成功制备了小鼠抗Hsp83蛋白的特异性抗体,此工作为深入研究Hsp83蛋白的功能奠定了基础。