绵羊MSTN多克隆抗体的制备及细胞毒性分析 |
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引用本文: | 郭吉星,张辉,胡圣伟,李天森,张文智,贺志瑞,张豫,孙志华,陈创夫.绵羊MSTN多克隆抗体的制备及细胞毒性分析[J].生物技术,2013(2):40-45. |
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作者姓名: | 郭吉星 张辉 胡圣伟 李天森 张文智 贺志瑞 张豫 孙志华 陈创夫 |
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作者单位: | 石河子大学生命科学学院;石河子大学动物科技学院 |
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基金项目: | 种质资源创新与功能基因发掘及利用专项(2012BB051);国家自然科学基金项目(31260534;31201800)资助 |
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摘 要: | 目的:研究绵羊肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)多克隆抗体的安全性。方法:将绵羊MSTN成熟肽基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化至BL21(DE3)中;利用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,West-ern blotting鉴定其免疫原性;ELISA检测抗体效价;通过检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的水平研究其细胞毒性。结果:成功获得了330 bp的绵羊MSTN成熟肽基因,表达蛋白分子量约为33 kDa,纯度达90%以上;Western blot检测表明MSTN蛋白具有免疫原活性;ELISA检测证实制备的抗体可与抗原蛋白特异性结合,抗体效价为l:25 600,细胞毒性试验表明高浓度的多克隆抗体(200μg/mL)对肌肉细胞无毒害作用。结论:制备的绵羊MSTN多克隆抗体具有生物学活性,对肌肉细胞无细胞毒性,为促生长效果验证提供了安全保障。
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关 键 词: | 肌肉生长抑制素 原核表达 多克隆抗体 细胞毒性 |
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