| 高渗提高凝结芽孢杆菌P4-102B菌株的电击转化效率 |
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| 引用本文： | 赵春云,杨颂,欧阳立明,王永红.高渗提高凝结芽孢杆菌P4-102B菌株的电击转化效率[J].微生物学通报,2016,43(6):1388-1394. |
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| 作者姓名： | 赵春云 杨颂 欧阳立明 王永红 |
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| 作者单位： | 华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 上海 200237,华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 上海 200237,华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 上海 200237,华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 上海 200237 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973计划)项目(No. 2013CB733600)；国家高技术研究发展计划(863计划)项目(No. 2015AA021005) |
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| 摘 要： | 【目的】凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)是一种非常有工业应用前景的微生物,但遗传转化的困难是限制对其进行代谢工程改造的关键因素。本研究主要考察生长培养基、电击缓冲液、复苏培养基中添加高渗剂如山梨醇、甘露醇等对凝结芽孢杆菌转化效率稳定性的影响,并对凝结芽孢杆菌电击转化条件进行优化。【方法】用穿梭质粒p NW33N电转化凝结芽孢杆菌P4-102B,系统地考察高渗条件下细胞生长阶段、感受态菌体浓度、电击缓冲液组分和复苏培养基组成等因素对转化效率的影响。【结果】同一电场压力下高渗体系转化效率较低渗体系明显提高且稳定性较好,菌体在含有0.5 mol/L山梨醇的LB培养基中生长到OD600为0.8时收集,用SMG0.5 mol/L山梨醇,0.5 mol/L甘露醇,10%(质量体积比)甘油]电击缓冲液洗涤菌体4次制备感受态,在固定电场强度14 k V/cm、脉冲时间5 ms、1 mm规格的电转杯进行电击转化,电转化后立即加入含有0.5 mol/L山梨醇和0.38 mol/L甘露醇的LB复苏培养基培养,能够获得最佳的转化效率2.7×102 CFU/μg DNA。【结论】使用高渗电击转化法能够提高电击转化的稳定性和重复性,并且可以获得较高的转化效率。
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| 关 键 词： | 凝结芽孢杆菌，电击转化，转化效率，高渗 |
High osmolarity improves the electro-transformation efficiency of the gram-positive bacteria Bacillus coagulans P4-102B |
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| ZHAO Chun-Yun,YANG Song,OUYANG Li-Ming and WANG Yong-Hong.High osmolarity improves the electro-transformation efficiency of the gram-positive bacteria Bacillus coagulans P4-102B[J].Microbiology,2016,43(6):1388-1394. |
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| Authors: | ZHAO Chun-Yun YANG Song OUYANG Li-Ming and WANG Yong-Hong |
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| Institution: | State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China,State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China,State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China and State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bacillus coagulans Electro-transformation Transformation efficiency High-osmolarity |
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