利用两种不相容质粒在大肠杆菌中共表达DFF45和DFF40

DNA断裂因子（DNA fragmentation factor，DFF）是细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白质之一，它由分子量为45kD和40kD的两个亚基构成，分别称为DFF45和DFF40。利用RT－PCR技术从人宫颈癌细胞系HeLa的总RNA中扩增了DFF45和DFF40的cDNA，分别克隆到到卡那霉素抗性表达载体pET-28a( )中，构建了pET28a-DFF45和pET28a-DFF40。用它们单独转化大肠杆菌BL21（DE3）后，经IPTG诱导都可获得高效表达。表达的重组蛋白质各自约占菌体总蛋白质的56％和22％。再将DFF45的cDNA克隆到氨苄青霉素抗性表达载体pET-21a( )中，得到了pET21a-DFF45。利用二者的不同抗性，将pET28a-DFF40和pET21a-DFF45共同转化大肠杆菌BL21（DE3），工程菌经IPTG诱导后实现了DFF45和DFF40的共表达，表达产物各约占菌体总蛋白质的30％和17％。为了研究这两种不相容质粒在细菌中共存的稳定性，我们将共转化子在同时含有卡那霉素和氨苄青霉素的液体培养基中连续培养14h，发现此时仍有75％以上的细菌可同时耐受两种抗生素，即同时含有pET28a-DFF45和pET28a-DFF40，说明利用两个具有不同抗性的不相容载体进行蛋白质共表达的方法是可行的。

Coexpression of DNA Fragmentation Factor Subunits in E.coli by Two Incompatible Plasmids